[일반생물학실험] cDNA 합성 및 Real-time PCR을 통한 유전자 발현 분석

1. 세포는 기본적으로 주위 환경에 적응하기 위해 필요한 유전자 발현을 증가시키고, 필요 없는 유전자 발현은 억제시키는 방법으로 유전자 발현을 조절한다.

2. 같은 세포를 서로 다른 영양환경 배지에서 배양한 후 유전자 발현을 비교하기 위해 cDNA를 합성하고 Real-time PCR을 통해 유전자 발현의 차이를 직접 확인해보고자 한다.

cDNA는 mRNA을 역전사시켜서 만든 DNA염기 서열에서 exon만이 존재하는 성숙 mRNA에 상보적 DNA이다.

cDNA을 통해서 발현된 DNA염기 배열이 무엇인지 파악할 수 있다.

Real-timePCR은 PCR과정이 진행하는 동시에 증폭되는 DNA표적 서열의 양을 측정하는 실험 방법이다.

PCR은 중합 효소 연쇄 반응으로 DNA의 목표 배열을 선택적으로 증폭시키는 기술이다.

PCR에는 증폭시키려는 특정 염기 배열에 맞는 2종류의 프라이머와 dNTP, Taq DNA중합 효소 등이 필요하며, DNA denaturation(95℃), annealing(60℃)DNA extension(72℃)단계를 거치면서 DNA의 표적 서열을 증폭한다.

한편 Real-timePCR은 PCR이 진행하는 동시에 DNA표적 서열의 양이 측정되는 기술이며, 측정된 DNA표적 서열의 양은 컴퓨터에 자동적으로 기록되고 확인할 수 있다.

참고로 증폭된 DNA표적 배열의 양은 SYBR Green이라는 형광 물질을 통해서 측정되지만 이 SYBR Green형광 물질은 이중의 사이로만 무너진다 증폭이 완료된 DNA표적 배열의 양만을 측정할 수 있도록 한다.

5′-AGCTTAAGCCTGGTA-3’3′-TCGAATTCGGACCAT-5’실험 방법

cDNA는 mRNA를 역전사시켜 만든 DNA 염기서열로 exon만이 존재하는 성숙 mRNA에 상보적 DNA다.

cDNA를 통해 발현된 DNA 염기서열이 무엇인지 파악할 수 있다.

Real-timePCR은 PCR 과정이 진행됨과 동시에 증폭되는 DNA 표적 서열의 양을 측정하는 실험 방법이다.

PCR은 폴리메라아제 연쇄반응으로 DNA 표적 배열을 선택적으로 증폭시키는 기술이다.

PCR에는 증폭시키고자 하는 특정 염기서열에 맞는 2종류의 프라이머와 dNTP, Taq DNA 중합효소 등이 필요하며 DNA denaturation(95℃), annealing(60℃), DNA extension(72℃) 단계를 거쳐 DNA 표적 배열을 증폭시키게 된다.

한편 리얼타임 PCR은 PCR이 진행됨과 동시에 DNA 표적 서열의 양이 측정되는 기술로 측정된 DNA 표적 서열의 양은 컴퓨터에 자동으로 기록돼 확인할 수 있다.

덧붙여서 증폭된 DNA 표적 배열의 양은 SYBR Green이라는 형광 물질을 통해 측정되는데, 이 SYBR Green 형광 물질은 이중 사이에만 끼어들게 되어 증폭이 완료된 DNA 표적 배열의 양만을 측정할 수 있게 한다.

5′-AGCTAAGCTGGTA-3′-TCGAAT-5`

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[일반생물학실험] cDNA 합성 및 Real-time PCR에 의한 유전자 발현 분석 보고서 1. 실험 목적 1.1. 세포는 기본적으로 주위 환경에 적응하기 위해 필요한 유전자 발현을 증가시키고, 필요 없는 유전자 발현은 억제시키는 방법으로 유전자 발현을 조절한다.

1.2. 같은 세포를 서로 다른 영양환경 배지에서 배양한 후 유전자 발현을 비교하기 위해 cDNA를 합성하고 Real-time PCR을 통해 유전자 발현의 차이를 직접 확인해보고자 한다.

2. 실험이론 및 원리 2.1. 실험배경 cDNA는 mRNA를 역전사시켜 만든 DNA 염기서열로 exon만이 존재하는 성숙 mRNA에 상보적인 DNA이다.

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Biomedical Research Lab 저자 유욱준, 신인철 출판분자방 출시 2013.07.01.